생물학적 제품의 잔류 숙주 세포 DNA 분석 방법 소개

숙주 세포는 생물학적 생성물의 초석이며, 포유류 세포주는 이제 생물학적 생성물의 발현 및 제조에 가장 널리 사용되는 숙주가되었습니다. 일반적인 숙주 세포에는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 아프리카 녹색 원숭이 신장의 베로 세포 및 인간 배아 신장 (HEK 293) 세포가 포함됩니다.

잔류 숙주 세포 DNA의 위험

발암 성

의 주요 발암 메커니즘잔류 숙주 세포 DNAMYC 및 RAS와 같은 우성 종양 유전자의 도입입니다. 이러한 우성 종양 유전자는 정상 세포를 직접 변형시켜 일부 정상 세포를 종양 세포로 분화시킬 수 있습니다. 잔류 숙주 세포 DNA의 삽입 돌연변이는 또한 잠재적 발암 요인이다.

감염성

잔류 숙주 세포 DNA는 복제 및 전사 증폭을 통해 감염성 바이러스 입자를 생산할 수있는 감염성 바이러스 게놈을 포함 할 수 있습니다. 따라서 잔류 숙주 세포 DNA의 감염 위험은 발암 위험보다 높을 수 있습니다.

면역원성

미생물 공급원으로부터의 게놈 DNA는 CpG 및 비메틸화 서열이 풍부하기 때문에 생체 내에서 재조합 단백질 약물의 면역원성 위험을 증가시킨다. 예를 들어, 박테리아로부터의 CpG-풍부 서열은 TLR (Toll-유사 수용체) 에 의해 매개되는 면역 반응을 유발할 수 있다.

잔류 숙주 세포 DNA의 검출 방법

DNA 프로브 하이브리드

이 방법에서, 시험 샘플 내의 외인성 DNA는 단일 가닥으로 변성되고, 고체상 막 상에 흡착된다. 특정 조건 하에서 마커로 표시된 상보적 단일 가닥 DNA 프로브와 재 혼성화되어 이중 가닥 DNA를 형성 할 수 있습니다. 그러나, 혼성화 방법의 검출 결과는 실제 잔류 숙주 세포 DNA 함량과 상당한 불일치를 가지며, 이 방법은 비교적 긴 검출 시간으로 불안정하다.

형광 염색

이 방법은 이중 가닥 DNA에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 이중 가닥 DNA 형광 염료를 사용하여 480 nm의 파장에서 여기될 때 강한 형광 신호를 생성합니다. 520 nm에서의 형광 신호는 형광계를 사용하여 검출된다. 형광 강도는 DNA 농도에 비례한다. 그러나, 이 방법의 형광 신호는 쉽게 간섭되고 특이성이 좋지 않아 환경 DNA 오염을 피할 필요가 있으며, 사용되는 모든 물질 및 시약은 DNA가 없어야 한다.

정량적 PCR

현재, 숙주 세포 DNA (HCD) 를 검출하기 위한 가장 통상적인 방법으로서, 이 기술은 형판을 정량적으로 분석하기 위해 형광 신호를 통한 PCR 프로세스의 실시간 모니터링을 포함한다. 화학 원리에 따라 TaqMan 프로브 방법과 SYBR 염료 방법의 두 가지 유형으로 나눌 수 있습니다.

TaqMan 프로브 방법은 PCR 반응 중에 형광 염료로 표지된 유전자 특이적 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 생성물을 검출하는 반면, SYBR 염료 방법은 과량의 형광 염료를 PCR 반응 시스템에 첨가한다. 염료는 구체적으로 DNA 이중 가닥에 통합되어 형광 신호를 방출한다. TaqMan 프로브 방법은 프로브 인식 단계를 통해 특이성을 증가시키는 반면 SYBR 염료 방법은 더 간단하고 간단합니다.