RCR 테스트의 주요 방법

RCR 테스트는 무엇입니까?

RCR 검사는 복제 역량 레트로바이러스 (RCR) 또는 복제 역량 렌티바이러스 (RCL) 의 존재를 검출하기 위해 CAR-T 세포 치료 제품의 제조 중에 사용되는 일련의 방법을 말합니다. 이러한 복제 능력 바이러스 (RCV) 는 바이러스 벡터의 경사 돌연변이를 통해 발생할 수 있고 복제 능력을 가지므로 잠재적으로 환자에게 안전 위험을 초래합니다. 의 목적RCR 테스트CAR-T 제품의 안전을 보장하고 RCV 오염을 방지하는 것입니다.

RCR 테스트의 주요 방법

지표 세포 배양 방법

이 방법은 표본을 지표 세포와 함께 공동 배양하고 세포질 효과 (CPE) 또는 바이러스 복제의 징후를 관찰하는 것을 포함한다. 이 방법은 RCR의 존재를 시각적으로 검출할 수 있지만 시간이 많이 걸린다.

ELISA 방법 (p24 단백질 분석)

이 방법은 바이러스 코어 단백질 p24 의 존재를 검출함으로써 RCR 오염의 존재를 결정한다. P24 단백질은 레트로 바이러스 및 렌티 바이러스의 핵심 단백질이며, 그 존재는 일반적으로 바이러스 입자의 존재를 나타냅니다.

PCR/qPCR 방법

이 방법은 특정 프라이머를 사용하여 중합 효소 연쇄 반응 (PCR) 또는 정량적 PCR (qPCR) 을 사용하여 바이러스 게놈 (예: psi-gag 또는 VSV-G 유전자) 의 특정 영역을 증폭합니다. RCR의 존재를 감지하는 기술. 짧은 검출 시간, 높은 감도 및 강한 재현성으로 인해 qPCR 방법은 CAR-T 제품의 신속한 방출 테스트에 널리 사용됩니다.

역 전사 활동 분석 (PERT)

이 방법은 역전사효소의 활성을 검출함으로써 RCR의 존재를 결정한다. 역전사 효소는 레트로 바이러스 및 렌티 바이러스의 복제에 필수적인 효소이며, 그 활성은 바이러스 복제의 마커로서 작용할 수 있다.

이들 방법 중, qPCR 방법은 효율성과 민감성으로 인해 많은 CAR-T 응용 회사에서 바람직하다. QPCR 방법을 사용하면 비교적 짧은 시간에 RCR 테스트 결과를 얻을 수있어 CAR-T 제품의 안전성과 품질을 보장합니다.

일반적으로 RCR 테스트는 제품에 복제 유능한 바이러스가 포함되어 있지 않은지 확인하기 위해 세포 치료 제품을 CAR-T 생산 과정에서 없어서는 안될 부분입니다. 따라서 치료를받는 환자의 2 차 종양 및 기타 잠재적 안전성 문제의 위험을 줄입니다.